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【锐博原创】如何用薄层色谱法TLC鉴别植物提取物?

所属分类:技术交流    发布时间: 2020-06-09    作者:
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薄层色谱(Thin Layer Chromatography)常用TLC表示,又称薄层层析,属于固-液吸附色谱。是近年来发展起来的一种微量、快速而简单的色谱法,它兼备了柱色谱和纸色谱的优点,能快速鉴别植物提取物。


一、什么是薄层色谱?

薄层色谱法(TLC),系将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上,成一均匀薄层。待点样、展开后,根据比移值(Rf)与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值(Rf)作对比,用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术,也用于跟踪反应进程。


二、薄层色谱原理

薄层色谱法是一种吸附薄层色谱分离法,它利用各成分对同一吸附剂吸附能力不同,使在流动相(溶剂)流过固定相(吸附剂)的过程中,连续的产生吸附、解吸附、再吸附、再解吸附,从而达到各成分的互相分离的目的。

植物提取物


三、薄层色谱法发展历史及现状

1、薄层色谱在中药分析中的简单回顾

自20世纪60年代薄层色谱取代纸色谱(纸层析)技术作为一种快速、简单、灵敏的鉴别手段应用于中药材及中成药的鉴别,薄层扫描用于许多中药及中成药的含量测定,并收载于中国药典以来,在控制中药质量方面起到积极的作用,已为中药生产及质量监督管理部门所广泛认同。
    在早期的中国药典的版本中,只有简单的化学颜色反应和显微鉴别,总灰分和含水量测量以及总浸出物测定,偶尔有总活性部位的含量测定,比如总生物碱,总黄酮,总皂苷等等。
薄层色谱法鉴别是在1985版中国药典〔一部〕被**收载的,但由于受到当时可获得的化学对照品的缺乏故仅限于个别的专论中。实践表明化学对照品的缺乏阻碍了TLC鉴别在草药中应用的拓展。甚至一些多数草药共同含有的化学对照品对于质量评价来说是不太重要的。为了解决TLC鉴别中的瓶颈问题,对照药材(Reference Crude Drug; RCD)自1990版中国药典起被引入了TLC鉴别项当中。众所周知,TLC的****的优势是能够提供类似图画的成像使得草药中的成分组成能够整体地被可视化。不同种属的草药产生的TLC图像具有各自的专属性。

2、薄层色谱在我国应用的现状

我们在技术上则一直滞留在初始阶段的状态,逐渐与其他发达国家拉开了距离。

我国大多数实验室依然使用实验室自制薄层板,同时多半使用的是简陋的器材,操作粗放,长期处在“低水平,广覆盖”的状态。

3、薄层色谱在其他国家药典中的应用

80年代后期虽然各国药典逐渐倾向于应用液相色谱技术,但在草药分析领域,薄层色谱仍然广泛地被应用,尤其是欧洲国家。他们在器械、仪器、计算机化、自动化等方面都有快速的发展。

欧洲国家草药分析实验室已放弃了自制薄层板,均改用商品预制板,以避免因不同实验室自制的薄层板质量不一致而结果互有差异。

4、05版药典在薄层鉴别收载方面的特点

1)、在已有的薄层鉴别中,增加了专属性更强的药材作对照。与对照品相比,本版药典更强调使用对照药材做鉴别,以增加整体专属性,新增的513个TLC鉴别中,使用对照药材的占61.6%。

2)、增加对照品同时作对照,使鉴别更具针对性和专属性对照品和对照药材同时使用,增强专属性,空白不得有干扰

3)、将有较好专属性的成分替换专属性不佳的成分


四、薄层色谱法(TLC)在植物提取物行业的应用

1、植提原料、植物提取物及成品真伪鉴别

药用植物的确定是薄层色谱*早的应用领域,通过比较同一块薄层板上的样品和对照物的差异进行判定。测试中样品必须达到预先设定的标准,如数量、顺序、位置和分离的条带的颜色。对于植提原料,*简便的方法是并排比较一个植提原料(参照物)和另一个植提原料(样品)的HPTLC指纹图谱。这一过程**需要规定的是所确立的需要检测样品的检测灵敏度,即样品可以通过测试,而其它样品如掺杂物无法通过。HPTLC指纹图谱的*大价值主要在于色谱的视觉印象,如果用多次检测可以进一步扩展,可以检测及描述各组分的光谱而无须知道每一斑点色谱的化学特性。另一优点是薄层色谱总是能够看到所有的样品,并且几个样品可以很容易的并排比较。对于原料、植物提取物及成品都可进行鉴别。该方法也适用于复杂样品如复方药物。以西安锐博生物科技研发生产的紫锥菊提取物,紫锥菊多酚,菊苣酸为例。

陕西植物提取物

图为紫锥花属根及常见伪品HPTLC色谱图

从左到右分别为:紫锥菊、紫锥花、蒲草、狭叶紫锥菊、2E,4E,8Z,10E/Z-十二烷基四烯酸异丁基酰胺、 β-谷甾醇、蛇鞭菊、银胶菊(2种不同样品)。

2、稳定性测试

药用物质及成品的稳定性测试是HPTLC一个相当新的应用。在这一测试中需证明药物在规定的储藏条件下经过一段时间不发生变化。另一方面,任何发生的变化需要能够被检测到。建立规定方法时通常对样品采用强制降解,如光照、高温、潮湿和水解等。采用HPTLC指纹图谱进行稳定性测试需要方法稳定、重现性好。严格的标准化、图像文档及现代化仪器设备可以**达到要求 。

3、标示物定量

TLC在草药分析中大多数的应用是对标示物进行定量分析。由于分离能力的限制,对于草药这样复杂的样品通常无法完全分离所有成分,所以大多数测定采用HPLC。然而人们常常忽视,实际上,只要有合适的仪器及方法,HPTLC达到定量分析的要求并不困难。HPTLC具有样品处理简单,对特定的组分可采用特殊的优化方法分离,可采用特殊的色谱前或色谱后衍生等优点。但是,如果不作调整,大多数用于鉴别的指纹图谱方法是不能用于定量分析的。以西安锐博生物科技研发生产的桑叶提取物,桑叶DNJ,桑叶黄酮为例。

陕西植物提取物

五、西安锐博生物在产品质量控制过程中也运用到薄层色谱,下图为桑叶黄酮在254nm和365nm波长紫外光下观察结果说明不同波长下产品和对照品斑点是相似的,证明西安锐博生物生产的桑叶提取物是正品。

西安锐博生物专注于植物提取物的研发与生产,核心产品有紫锥菊提取物,荷叶提取物,桑叶提取物,苦瓜提取物。欢迎查看我司原创的其他植物提取物技术文章。

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