COA详解之重金属检查法

1.中国药典2015版重金属检査方法

本法所指的重金属系指在规定实验条件下能与硫代乙酰胺或硫化钠作用显色的金属杂质。

标准铅溶液的制备  称取硝酸铅0.1599g,置1000ml量瓶中，加硝酸5ml与水50ml溶解后，用水稀释至刻度，摇勻，作为贮备液。

精密量取贮备液10ml，置100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每lml相当于10μg的Pb)。本液仅供当日使用。

配制与贮存用的玻璃容器均不得含铅。

**法

除另有规定外，取25ml纳氏比色管三支，甲管中加标准铅溶液一定量与醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml后，加水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml，乙管中加入按各品种项下规定的方法制成的供试品溶液25ml，丙管中加入与乙管相同重量的供试品，加配制供试品溶液的溶剂适量使溶解，再加与甲管相同量的标准铅溶液与醋酸盐缓冲液（pH3.5)2ml后，用溶剂稀释成25ml;若供试品溶液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管、丙管一致；再在甲、乙、丙三管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，当丙管中显出的颜色不浅于甲管时，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。如丙管中显出的颜色浅于甲管，应取样按第二法重新检査。

如在甲管中滴加稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液,仍不能使颜色一致时，取样按第二法检查。

供试品如含高铁盐影响重金属检査时，可在甲、乙、丙三管中分别加入相同量的维生素C 0.5-1.0g,再照上述方法检查。

配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过lml,氨试液超过2ml,或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，甲管溶液应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(PH3.5)2ml与水15ml,微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水或各品种项下规定的溶剂稀释成25ml。

第二法

除另有规定外，当需改用第二法检査时，取各品种项下规定量的供试品，按炽灼残渣检查法（通则0841)进行炽灼处理，然后取遗留的残渣；或直接取炽灼残渣项下遗留的残渣；如供试品为溶液，则取各品种项下规定量的溶液，蒸发至干，再按上述方法处理后取遗留的残渣；加硝酸0.5ml,蒸干，至氧化氮蒸气除尽后（或取供试品一定量，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸0.5-lml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸0.5ml，蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500-600℃炽灼使完全灰化），放冷，加盐酸2ml，置水浴上蒸干后加水15ml，滴加氨试液至对酚酞指示液显微粉红色，再加醋酸盐缓冲液（pH3.5)2ml,微热溶解后，移置纳氏比色管中，加水稀释成25ml，作为乙管；另取配制供试品溶液的试剂，置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液(pH3.5)2ml与水15ml,微热溶解后，移置纳氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml，作为甲管；再在甲、乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。

第三法

除另有规定外，取供试品适量，加氢氧化钠试液5ml与水20ml溶解后，置纳氏比色管中，加硫化钠试液5滴，摇匀，与一定量的标准铅溶液同样处理后的颜色比较，不得更深。

2.食品添加剂中重金属限量试验

本标准规定了食品添加剂中重金属的限量试验方法。本标准适用于食品添加剂中重金属的限量试验。

原理  在弱酸性(pH3-4)条件下，试样中的重金属离子与硫化氢作用，生成棕黑色，与同法处理的铅标准溶液比较，做限量试验。

标准品  高纯硝酸铅[Pb（N03）2]，纯度为99.99%或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质。

样品处理

无机试样的制备:无机试样的“试样处理”可按各产品质量规格的要求进行溶解或消化等前处理。试验应在无元素污染的通风柜中进行。

有机试样的制备:有机试样的“试样处理”除按各产品质量规格的要求外，一般可按下述方法进行:

a)湿法消解:称取5.00g试样，置于25 ml锥形瓶中，加10 ml-15 ml硝酸浸润试样，放置片刻(或过夜)后，于电热板上加热，待反应缓和后取下放冷，沿瓶壁加入5 ml硫酸，再继续加热至瓶中溶液开始变成棕色，不断滴加硝酸(如有必要可滴加些高氯酸)至有机质分解完全，继续加热至生成大量的二氧化硫白色烟雾，*后溶液应呈无色或微黄色。冷却后加20 ml水，煮沸除去残余的硝酸至产生白烟为止。如此处理两次，放冷。将溶液移入50 ml容量瓶中，用水洗涤锥形瓶，将洗涤液并入容量瓶中，加水定容至刻度，混匀。每10 ml溶液相当于1.0g样品。取同样量的硝酸、硫酸，同时做试剂空白试验。

b)干法消解:称取5.00g试样，置于硬质玻璃蒸发皿或石英坩埚中，加入适量硫酸浸润试样，于电炉上小火炭化后，加2 ml硝酸和5滴硫酸，小心加热直到白色烟雾挥尽，移入马弗炉中，于500℃灰化完全，冷却后取出，加2 ml盐酸溶液(6 mol/l,)湿润残渣，于水浴上慢慢蒸发至干。用1滴浓盐酸湿润残渣，并加10 ml水，于沸水浴上再次加热2 min，将溶液移入50 ml容量瓶中，如有必要应过滤，用少量水洗涤坩埚和滤器，洗滤液一并移入容量瓶中，定容后混匀，每10 ml该溶液相当于1.0 g试样。在试样灰化同时，另取一坩埚，同时做试剂空白试验。

c)压力消解罐消解法:按压力消解罐使用说明书称取适量试样(**至0.001 g)于聚四氟乙烯内罐，加硝酸2 ml?4ml浸泡过夜。再加过氧化氢2ml?3 ml(总量不能超过罐容积的1/3)。盖好内盖，旋紧不锈钢外套，放入恒温干燥箱，120℃-140℃保持3h-4h，在箱内自然冷却至室温，用滴管将消化液洗入或过滤入(视消化后试样的盐分而定)容量瓶中，用水少量多次洗涤罐，洗液合并于容量瓶中并定容至刻度，混匀备用;同时作试剂空白。

测定

A管(标准管):吸取含铅量相当于指定的重金属限量的铅标准使用液(不低于10 μg铅)于50 ml纳氏比色管中(如试样经处理，应同时吸取与试样液等量的试剂空白液)，加水至25 ml,混匀，加1滴酚酞指示液，用稀盐酸(6 mol/ l,)或稀氨水((1 mol/ L)调节pH至中性(酚酞红色刚褪去)，加入5 ml pH3.5的乙酸盐缓冲液，混匀，备用。

B管(样品管):取一支与A管所配套的纳氏比色管，加入10 ml-20 ml(或适量)试样液，加水至25 ml,混匀，加1滴1%酚酞指示液，用稀盐酸(6 mol/l,)或稀氨水((1 mol/l,)调节pH至中性(酚酞红色刚褪去)，加入5 ml pH 3.5的乙酸盐缓冲液，混匀，备用。

C管:取一支与A、B管所配套的纳氏比色管，加入与B管等量的相同的试样液，再加入与A管等量的铅标准使用液(10 μg/ml,)，加水至25 ml,混匀，加1滴1%酚酞指示液，用稀盐酸(6 mol/l)或稀氨水(1 mol/l,)调节pH至中性(酚酞红色刚褪去)，加入5 mlpH3.5的乙酸盐缓冲液，混匀，备用。

向各管中加入10 ml新鲜制备的硫化氢饱和溶液，并加水至50 ml刻度，混匀，于暗处放置5 min后，在白色背景下观察，B管的色度不得深于A管的色度，C管的色度应与A管的色度相当或深于A管的色度，则可判定为样品中重金属含量(以铅计)低于A管(标准管)对应的重金属含量(以铅计)。

3.欧洲药典中重金属检测方法

方法A

供试溶液：12ml待测水溶液，2ml pH 为3.5 的缓冲溶液，混合后加1.2ml 的硫代乙酰胺试液，立即混合。

对照溶液：10ml的标准铅溶液（1ppm or 2ppm Pb），2mlpH为3.5的缓冲溶液，2ml的待测液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，2mlpH为3.5的缓冲溶液，2ml的测试溶液。混合后加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合，同空白溶液比较，对照溶液显浅棕色。    2分钟后，供试的溶液颜色不得比对照溶液深。

方法B

用含*少量水的溶剂（例如含15％水的二氧杂环乙烷或含15％水的丙酮） 溶解规定量的供试品，制成待测液

供试溶液：12ml待测液，2mlpH为3.5的缓冲溶液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。

对照溶液：10ml的标准铅溶液（1ppm or 2ppm Pb），2ml pH为3.5的缓冲溶液，2ml的待测液，混合后加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，2ml pH为3.5的缓冲溶液，2ml的测试溶液。混合后加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合，同空白溶液比较，对照溶液显浅棕色。 2分钟后，供试溶液的颜色不得比对照溶液深。

方法C

供试溶液：规定量（不超过2g）的待检测物质置于坩埚内，加4ml的250g/l 的硫酸镁溶液（稀硫酸溶解硫酸镁），玻璃棒搅拌混合，小心加热。如果混合物还是液体，则在水浴中蒸发使其干燥。连续加热灼烧，灼烧温度不超过800℃， 直到获得白色或灰白色的残渣。取出，冷却后以稀硫酸润湿残渣，加热蒸发后继 续灼烧，灼烧的总时间不能超过2小时。取出，冷却。如法制取2份残渣，分别 加入5ml稀盐酸，0.1ml的酚酞试液，然后滴加氨水，直到粉红色出现。冷却， 滴加冰醋酸至颜色消失，颜色消失后再多加0.5ml冰醋酸。必要时过滤，并洗涤残渣。加水稀释至20ml，制成待测液。取12ml该待测液，加2ml pH3.5 的缓冲 溶液，混合，加1.2ml 硫代乙酰胺试液，立即混合，制成供试溶液。

对照溶液：4ml 250g/l的硫酸镁溶液（稀硫酸溶解硫酸镁），规定量的标准铅溶液（10ppmPb）。按供试溶液的制备方法，加热灼烧，加盐酸，加酚酞试液， 加氨水及冰醋酸等，并用水稀释至20ml。取10ml的该溶液，加2ml待测液，2mlpH3.5的缓冲溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，加2ml待测液，2ml pH3.5的缓冲溶液，混合。加1.2ml 硫代乙酰胺试液，立即混合。同空白溶液比较，对照溶液显浅棕色。2分钟后，供试溶液的颜色不得比对照溶液深。

方法D

供试溶液：在坩埚内，充分的混合规定量的待检测物质和0.5克的氧化镁 R1，灼烧退去红色，直至出现白色和灰白色的物质。如果灼烧30分钟后仍有颜 色，取出冷却，用玻璃棒混合，继续加热。如有必要，重复此项操作。在800℃ 加热约1小时。分别制备两份残渣，各加5ml溶液（等体积的盐酸R1和水混合）， 加0.1ml 酚酞试液，滴加氨水直至有粉红色出现。冷却，加冰醋酸直到溶液褪去颜色，再多加0.5ml冰醋酸。如有必要，过滤并洗涤残渣。加水稀释至20ml，制成待测液。取12ml待测液，加2mlpH3.5的缓冲溶液，混匀，加1.2ml硫代乙酰胺试液，立即混合。

对照溶液：0.5克的氧化镁R1，加上规定量的标准铅溶液（10ppmPb），在 100～105℃烘箱内干燥，然后按供试溶液的制备方法灼烧，加盐酸，加酚酞试液， 加氨水及冰醋酸等。并加水稀释至20ml。取10ml的该溶液，加2ml待测液，2ml pH3.5的缓冲溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。

空白溶液：10ml的水，加2ml待测液，2ml pH3.5 的缓冲溶液，混合。加1.2ml的硫代乙酰胺试液，立即混合。同空白溶液比较，对照溶液显浅棕色。 2分钟后，供试溶液的颜色不得比对照溶液深。

方法E

溶解规定量的待测物质于30ml水中，按下图准备过滤装置，调整注射器容量为50ml，在盘子上放置一个孔径为3μm 过滤薄膜，过滤器上有一个前置过滤器（图1）。

图1 重金属检查装置（标出尺寸的单位为mm）

取出活塞，将供试溶液注入注射器，均匀用力压活塞，使供试溶液全部通过滤膜，移开活塞前置的过滤装置，观察薄膜是否被杂质污染，如有杂质，重复以上操作。

在预过滤的溶液中加入pH3.5的缓冲剂2ml，加上1.2ml的硫代乙酰胺溶液，混合后静止10分钟，再按照上面的方法进行过滤，过滤液先经过滤膜再经过预滤装置。均匀压滤，取出用滤纸干燥。用同样的方法取规定量的标准铅溶液 （1ppmPb），制备一个标准铅斑。供试溶液的铅斑颜色不得比标准铅斑深。

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